本发明提供了一种鸭β－防御素９重组蛋白的制备方法。本发明采用分子生物学技术，从鸭体内克隆到鸭β－防御素（ＡｖＢＤ）９基因，选用合适的表达宿主在体外表达鸭ＡｖＢＤ　９重组蛋白。进一步研究发现，鸭ＡｖＢＤ　９重组蛋白具有广谱抗菌活性和免疫促进作用。采用本发明的方法得到的重组鸭ＡｖＢＤ　９重组蛋白的有益效果有：１）能抑杀多杀性巴氏杆菌、枯草芽胞杆菌、猪致病性琏球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等菌；２）对温度和酸碱度有很高的稳定性，在－２０～１００℃处理３０ｍｉｎ或ｐＨ　３～１２条件下处理３０ｍｉｎ，其杀金黄色葡萄球菌活性不变。