主题：规模化猪场仔猪黄白痢大肠杆菌的分离鉴定

仔猪黄白痢又称新生仔猪腹泻，是仔猪黄痢和白痢的总称，很大一部分是由致病性大肠杆菌引起的一种高致病性的传染病，以排出白色或黄色稀粪和迅速死亡为特征。由于大肠杆菌血清型众多，且不同年龄的猪感染大肠埃希菌的主要血清型不同，因而疫苗的使用保护性差，且由于耐药性的产生，都给本病的防治造成一定的难度。本试验对某猪场发生仔猪黄白痢的病原菌进行分离鉴定，旨在为该养猪场制定有效的防制措施提供依据。

　　1材料与方法

　　1．1病料与试剂

　　来源于镇江地区某规模化猪场11窝30日龄内发生黄白痢的仔猪，用灭菌棉拭子从腹泻仔猪直肠采集粪便55份，进行细菌的分离鉴定。

　　营养肉汤、营养琼脂、麦康凯琼脂、SS培养基、三糖铁培养基；生化鉴定培养基购自杭州天和微生物试剂公司；药敏纸片购自杭州天和微生物试剂公司；大肠杆菌O抗原定型血清购自中国兽医药品卫生监察所。

　　1．2试验动物

　　体重20-25 g健康小白鼠90只，雌雄各半，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。

　　1．3细菌分离

　　猪e网网友建议用棉拭子采集发生黄白痢的仔猪的肛门粪便，混悬于装有灭菌生理盐水的灭菌离心管中，摇动离心管彻底洗涤拭子粪便于管中，并靠壁旋动拭子，挤出液体。用接种环取上述大便悬液1—3环，接种于麦康凯琼脂培养基平板，置37℃培养24 h后观察培养特性。将以上麦康凯培养基中的红色菌落，再接种于SS培养基、麦康凯培养基中，置37℃培养24 h后进行纯化培养，观察菌落的生长情况，并取麦康凯培养基上的单个菌落进行涂片，革兰氏染色、镜检。

　　1．4生化特性试验

　　按文献方法进行。取纯培养细菌接种于营养肉汤中，37℃培养24 h后，接种到各微量发酵管及种生化培养基中，置37℃培养24 h后，观察记录结果。

　　1．5致病性试验

　　将接种细菌后的营养肉汤37℃培养24 h后，分别腹腔接种体重20 g左右的小白鼠，每株接种10只，每只0．2 mL(含菌量约为8．0×108CFU／mL)，同时用10只小白鼠接种无菌肉汤作对照。饲养观察、记录死亡数，并从死亡小白鼠的心血中分离细菌。

　　1．6血清型鉴定

　　经分离及初步鉴定的细菌送扬州大学进行血清型鉴定。

　　1．7药敏试验

　　按K—B法，选取上述致病性的大肠杆菌菌株做药敏试验。置37℃培养24 h后观察，根据抑菌圈直径大小来判定其对药物的耐受性。

2 结果

　　2．1细菌分离

　　从病料中分离到8株细菌，在营养肉汤中呈均匀一致的混浊，管底形成灰白色沉淀，液面管壁有菌环；在营养琼脂上长成圆形、隆起较湿润的中等大小的灰白色菌落；麦康凯琼脂上形成中等大小砖红色、圆形凸起的菌落；在SS琼脂上呈红色小菌落。镜检为两端钝圆并多以单个存在的革兰氏阴性粗短杆菌，具有典型大肠杆菌培养特性和形态特征。

　　2．2细菌的生化特性

　　经生化试验鉴定为大肠杆菌。该8株细菌均能发酵棉籽糖等，枸椽酸盐利用、尿素分解绝大部分呈阴性，均不产生硫化氢，吲哚、M．R阳性，结果符合大肠杆菌生化特征，见表1。

　　2．3致病性试验

　　接种24 h后，观察小白鼠出现死亡情况，而对照组小白鼠均健活。从死亡小白鼠心血中分离到与接种菌株形态、培养特性相同的细菌，因此基本确定小白鼠死亡是由接种菌引起的，说明从病料中分离到的8株菌均为致病性大肠杆菌。

　　2．4血清型鉴定

　　经血清型鉴定，该8株大肠杆菌有3种血清型，其余的未定型，结果见表3。

　　2．5药敏试验

　　选用临床常用的10种抗生素药敏片，进行的耐药性试验结果见表4。从表4可以看出抑菌作用最强的是丁胺卡那霉素、头孢孟多、复达欣等，高敏菌株达88％；庆大霉素、洛美沙星和头孢噻吩敏感性居中；氨苄西林、氯霉素和环丙沙星的抑菌作用较低。

　　3讨论

　　从腹泻仔猪粪便棉拭子中分离得到8株细菌，经形态学观察、革兰氏染色、生化特性及培养特性鉴定为大肠杆菌，而且其对小白鼠表现出较强的致病性，由此可以初步推测该猪场仔猪黄白痢的发生与大肠杆菌相关。

　　药敏试验的结果说明，从本猪场分离的大肠杆菌出现了较广的耐药性。从本次药敏试验看出本场的大肠杆菌对丁胺卡那、复达欣和头孢孟高敏，但也出现了向中敏区和低敏区过渡以及低敏区比例增加的明显趋势，如不注意临床合理用药，随时都会有产生耐药株的可能。因此在临床上用药应引起高度重视，最好根据药敏试验结果进行合理选择。

　　在分离的8株致病性大肠杆菌中只有3株鉴定出抗原血清型，有5株尚未鉴定出血清型，显示了该猪场致病性大肠杆菌血清型的复杂性。由于样品为部分病料，本场是否存在其他类型的致病性大肠杆菌还需要进一步的分离鉴定。