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标题：规模化猪场仔猪黄白痢大肠杆菌的分离鉴定

1楼

庆大发表于：2013/10/23 13:54:00

仔猪黄白痢又称新生仔猪腹泻，是仔猪黄痢和白痢的总称，很大一部分是由致病性大肠杆菌引起的一种高致病性的传染病，以排出白色或黄色稀粪和迅速死亡为特征。由于大肠杆菌血清型众多，且不同年龄的猪感染大肠埃希菌的主要血清型不同，因而疫苗的使用保护性差，且由于耐药性的产生，都给本病的防治造成一定的难度。本试验对某猪场发生仔猪黄白痢的病原菌进行分离鉴定，旨在为该养猪场制定有效的防制措施提供依据。

　　1材料与方法

　　1．1病料与试剂

　　来源于镇江地区某规模化猪场11窝30日龄内发生黄白痢的仔猪，用灭菌棉拭子从腹泻仔猪直肠采集粪便55份，进行细菌的分离鉴定。

　　营养肉汤、营养琼脂、麦康凯琼脂、SS培养基、三糖铁培养基；生化鉴定培养基购自杭州天和微生物试剂公司；药敏纸片购自杭州天和微生物试剂公司；大肠杆菌O抗原定型血清购自中国兽医药品卫生监察所。

　　1．2试验动物

　　体重20~25 g健康小白鼠90只，雌雄各半，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。

　　1．3细菌分离

　　用棉拭子采集发生黄白痢的仔猪的肛门粪便，混悬于装有灭菌生理盐水的灭菌离心管中，摇动离心管彻底洗涤拭子粪便于管中，并靠壁旋动拭子，挤出液体。用接种环取上述大便悬液1—3环，接种于麦康凯琼脂培养基平板，置37℃培养24 h后观察培养特性。将以上麦康凯培养基中的红色菌落，再接种于SS培养基、麦康凯培养基中，置37℃培养24 h后进行纯化培养，观察菌落的生长情况，并取麦康凯培养基上的单个菌落进行涂片，革兰氏染色、镜检。

　　1．4生化特性试验

　　按文献方法进行。取纯培养细菌接种于营养肉汤中，37℃培养24 h后，接种到各微量发酵管及种生化培养基中，置37℃培养24 h后，观察记录结果。

　　1．5致病性试验

　　将接种细菌后的营养肉汤37℃培养24 h后，分别腹腔接种体重20 g左右的小白鼠，每株接种10只，每只0．2 mL(含菌量约为8．0×108CFU／mL)，同时用10只小白鼠接种无菌肉汤作对照。饲养观察、记录死亡数，并从死亡小白鼠的心血中分离细菌。

　　1．6血清型鉴定

　　经分离及初步鉴定的细菌送扬州大学进行血清型鉴定。

　　1．7药敏试验

　　按K—B法，选取上述致病性的大肠杆菌菌株做药敏试验。置37℃培养24 h后观察，根据抑菌圈直径大小来判定其对药物的耐受性。

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