标题：一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用

本发明公开了一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用，该病毒含有由猪细小病毒ＶＰ２基因、口蹄疫病毒２Ａ基因和猪圆环病毒Ｃａｐ基因依次连接构成的外源基因。该方法包括：（１）构建包含ＰＲＶ全基因组的细菌人工染色体ｐＰＲＶ；（２）将ｐＰＲＶ中的ＣＭＶ启动子替换为ＥＦ１启动子；（３）将Ｐｃｍｖ－Ｖ２Ｃ－ＢＧＨ－ｐＡ表达框替换ｐＰＲＶ－ＥＦ１的ｇＥ基因，获得ｐＰＲＶ－Ｖ２Ｃ－ΔｇＥ；（４）ｐＰＲＶ－Ｖ２Ｃ－ΔｇＥ与ｐＣＡＧＧＳ－ＮＬＳ／Ｃｒｅ两种质粒共转染Ｖｅｒｏ细胞系，筛选获得删除ｐＨＡ２质粒的ｒＰＲＶ－Ｖ２Ｃ－ΔｇＥ。本发明重组病毒同时能免疫猪细小病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病毒等引起的三种疾病。