泥鳅为多次性产卵鱼类。在自然条件下， 4 月上旬开始繁殖， 5 一 6 月是产卵盛期，一直延续到 9 月还可产卵。繁殖的水温为 18 一 30 ℃ ，最适水温为 22 一 28 ℃ 。
雌鳅性成熟较雄鳅迟，体长 5 厘米时，雌鳅体内有一对卵巢，体长 8 厘米时， 2 个卵巢愈合在一起，成为 1 个卵巢，并由前端向后端延伸，这时整个卵巢发育开始成熟。
雌鳅怀卵量因个体大小不同而有很大差异。最小性成熟个体体长 8 厘米，怀卵量约 2 000 粒左右， 10 厘米的怀卵量为 7000一 100 00粒，体长 12 厘米的怀卵量 12000一 14000粒，体长15厘米的怀卵量为15000一 18 000粒，体长 20 厘米怀卵量为 24000粒左右。怀卵量最多的可以超过 6 . 5 万粒。卵圆形，卵径 0 . 8 一 1 . 0毫米左右，吸水后膨胀到 1 . 3 一 1 . 5 毫米，卵黄色，为半黏性，黏附力不强。由于卵在卵巢内成熟度不一致，每次排卵量约为怀卵数的 50 ％一 60 ％。
雄鳅最小性成熟个体体长在 6 厘米以上，性成熟较雌鳅早，雄鳅精巢一对，位于腹腔两侧，呈带状且不对称，右侧的精巢比左侧的长而狭窄，重量也轻一些，当雄鳅体长为 9 一 11厘米时，精巢内的精子约有亿个。
泥鳅产卵喜在雨后晴天的早晨，产卵前，雌鳅在前面游动．数尾雄鳅在其后紧追不舍，发情时，雌雄鳅多活动在水表面和鱼巢周围，当发情达到高潮时，雌雄鳅的头部和躯体互相摩擦并相继游出水面。雄鳅追逐纠缠雌鳅，并卷曲于雌鳅腹部，以刺激雌鳅产卵，同时雄鳅也排出精子，进行体外受精，这种动作因个体大小不同而次数也不相等，个体大的可在 10 次以上，受精卵先黏附在水草或其他附着物上，随着水的波动，极易从附着物上脱落沉到水底。